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    CCK-8試劑盒實驗原理和操作步驟詳解
    更新時間:2019-09-17 點擊次數:9037次
       CCK-8試劑盒實驗原理和操作步驟詳解
      Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒,是一種基于WST-8(化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),CCK-8試劑盒適用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
      CCK-8試劑盒實驗原理:
      WST-8屬于MTT的升級產品,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物(formazan)。顏色的深淺與細胞的增殖成正比,與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值,間接反映活細胞數量。
      CCK-8試劑盒用途:
      CCK-8法應用非常廣泛,如藥物篩選、細胞增  殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。
      CCK-8試劑盒用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。那么用于細胞毒性測定的操作步驟是什么呢?
      方法/步驟1:
      在96孔板中配制100μl 的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養 24 小時 (在 37℃,5% CO2 的條件下)。
      方法/步驟2:
      向培養板加入 10μl 不同濃度的待測物質。
      方法/步驟3:
      將培養板在培養箱孵育一段適當的時間 (例如: 6,12, 24 或 48 小時)。
      方法/步驟4:
      向每孔加入 10μl CCK8 溶液(Engreen) (注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數)。
      方法/步驟5:
      將培養板在培養箱內孵育 1-4 小時。
      方法/步驟6:
      用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。
      方法/步驟7:
      如果暫時不測定OD值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10μl 0.1 M HCl溶液或者1%w/vSDS 溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。
      以上就是CCK-8試劑盒的相關使用說明,以供參考!

    滬公網安備 31011802001678號

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